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細胞株培養(yǎng)技術的三大要素

2021-11-25 [2630]


細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。下面上海研域生物分享細胞株培養(yǎng)技術的三大要素:


1、取材

細胞株培養(yǎng)的材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織,取材時避免用壞死組織,要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位,瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。細胞株的培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

細胞株

2、成纖維細胞排除

在細胞株培養(yǎng)中常混雜有一些成纖維細胞,培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長,并常壓過癌細胞,導致癌細胞生長受阻以至消失,應仔細排除。排除方法常有:機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。


3、提高細胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據實驗經驗,細胞株要經過對新環(huán)境的適應才能生長,因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子,根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子,如胰島素、氫化可di松,雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。


細胞株待轉化細胞數量明顯上升,并出現(xiàn)細胞團塊后,可轉入細胞培養(yǎng)瓶中,加培養(yǎng)基,常溫培養(yǎng)半個月,一般每隔一周觀察一次,決定是否換液、傳代,靠譜的細胞株的每個步驟都至關重要。細胞生長達一定數量后凍存,凍存前應進行核型分析和存檔。


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